Xeno-Free人类间充质干细胞培养基

Xeno-Free人类间充质干细胞培养基

产品货号：Cat.No.:AC-1001003

产品基本信息

产品简介

Xeno-Free人类间充质干细胞培养基是埃泽思生物（Applied Cell^TM）自主研发的一款无外源动物成分的人类间充质干细胞培养基。可应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持其多向分化潜能。GMP级别生产车间，严格执行cGMP操作标准，各项指标优于行业标准。

Xeno-Free人类间充质干细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。 

产品特性

l 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

l 全程无血清生产，极大降低批次间差异，避免实验条件的重复摸索。

l 培养载体无需包被，直接培养。

l 扩增效率高，24h左右增殖翻倍，节省培养时间。

产品内容

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实验准备

人类间充质干细胞培养基配制

1） 37℃快速解冻人类间充质干细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后缓慢摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。

2）将添加剂以10%比例加入到人类间充质干细胞基础培养基中，混匀，即为人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）。人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。

3）人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，具体操作方法及其他相关技术资料请参考埃泽思生物官网。

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

hMSC细胞复苏(10cm dish)

1.  从液氮中取出冻存的hMSC细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴快速融解。

2.在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）。

3.300g 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）重悬细胞。

4.将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。

5.第2天吸掉原来培养基，加入新鲜的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）继续培养，每2天更换培养液。

hMSC细胞传代培养

1.在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。

2.在超净台/安全柜中，吸走培养瓶中旧的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003），加入PBS溶液洗一次，加入人类间充质干细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。

3.室温孵育5-6分钟或37℃孵育3-5分钟，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底，克隆内部细胞间出现间隙，停止消化。

4.加入与消化液2倍体积的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）中和消化，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。

5.将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。

6.弃上清，加入人类间充质干细胞培养基（AC-1001003），重悬细胞，1：3-1：4传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 条件下培养。

注意：细胞传代所需的时间：2-4天。5代及之前的细胞，生长速度较快。5代以后的细胞，生长速度稍缓。

hMSC细胞冻存

1.  细胞达到80-90%汇合度， 吸走旧的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003），并且加入PBS溶液清洗。

2.加入人类间充质干细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育5-8分钟或37℃孵育3-5分钟，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底，克隆内部细胞间出现间隙，停止消化。

3.加入与消化液2倍体积的人类间充质干细胞培养基（AC-1001003）中和消化，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散，将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。

4.缓慢加入适量Serum-free细胞冻存液（AC-1001005/1001006），调整细胞密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。

5.轻轻地重悬细胞，将重悬均匀的细胞按等份加入到无菌冻存管（需提前做好标记）中，旋紧冻存管盖 。

6.直接放入-80℃，一天或两天后放入液氮中长期保存。

细胞形态图

质量控制