使用目的：
本试剂盒用于测定样本中α-酮戊二酸（αKA）的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中α-酮戊二酸（αKA）水平。用纯化的α-酮戊二酸（αKA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入α-酮戊二酸（αKA），和 HRP 标记的α-酮戊二酸（αKA）抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的α-酮戊二酸（αKA）的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中α-酮戊二酸（αKA）的含量。
操作步骤
1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
