大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒

【产品文献支持】
影响因子(IF)=4.26；Hyperlipidemia induces typical atherosclerosis development in Ldlr and Apoe deficient rats；华东师范大学；《Atherosclerosis》

一、详细介绍：

【产品名称】：大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
【产品用途】：被测样品定性定量分析
【产品规格】：96T/48T(两种规格)
【检测方法】：酶免法/酶联免疫法(ELISA)
【保存条件】：2-8℃
【供 货 期】：1-3天(现货供应)
【产品性状】：液体盒装
【产品价格】：(含税含运费，我们全程提供ELISA实验技术指导和ELISA试剂盒免费代测)
【销售优势】：价格行业优势、质量可靠、如果出现客观质量问题包换退
【待检样本】：体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等
【产品保质期】：半年(六个月)
二、选择及服务

我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。

◎应尽量选择正规厂家，产品经相应政府部门审核认可，试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。

◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的低量的能力；2）为试剂对大量样品中阳性检出的能力。

◎特异性：常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标。

◎精密度：ELISA试剂一般指其批内CV%，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围。

◎准确度：通过添加回收实验进行评价。

◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。

◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。

◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理。

◎试剂评价：需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。

三、检测概述
大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
四、技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法(检测未知抗体)
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
五、样本前处理注意事项

1 均质

组织样本:肉、肝食品类切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。

水产样本：去除样品的非食用部分，食用部分切细，用均质器均浆；原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。

蛋类：鲜蛋去壳，蛋黄和蛋白充分混匀。

水果、蔬菜类：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。

2 振荡提取

 将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中，振荡，使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部，提取待测组分。

2.1振荡方式：振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。

2.2 在组织样本中加入有机溶剂之间提取时，应边加边振荡，防止组织凝结成团，不利于提取。

3. 在用有机溶剂提取过程中，如果出现乳化现象，解决的方法有：①用细头轻轻的搅拌，破坏乳化后，再重复离心。②再加入适量的提取剂，重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。

4 浓缩

 由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干，再用复溶液溶解干燥残留物。

浓缩方式：

 氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。

注意：

1在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，防止杂质干扰。

2在吹样本时，针头应在液面上空，避免与样本接触，防止产生交叉污染。

3样本吹干后应立即取下，避免吹的时间过长，影响终检测结果。

4不同的药物，吹干后样本的保质期不同，提倡待样本回到室温后立即复溶。

5 净化

 经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程，我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的常见的净化是：液液分配法。

 比如：用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷，在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象，可以60℃水浴加热，至乳化现象消失或减弱后，加大离心转速进行离心。

六、报告内容及标准
1、大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒标准曲线；
2、详细的实验步骤；
3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）；
4、实验进行阶段，我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。
七、订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 

2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 

3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 

4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。