检测波长:450 nm
所需样本体积: 50-100ul
适用范围:仅供科研
保存及有效期:2-8℃，六个月，-20℃一年
检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
供应的种属有：大象、牛、大鼠、小鼠、人、马、兔、大熊猫、类人猿、蜥蜴、蝌蚪、菠菜、羊、犬、鱿鱼、蜗牛、扁豆、豌豆、马铃薯、蝈蝈、豚鼠、仓鼠、金黄地鼠、鹅、鸽子、秃鹫、河马、犀牛、野猪、东北虎、斑鸠、蚯蚓、鲤鱼、眼镜蛇、青蛙、丹顶鹤、鸟类等动植物种属

使用目的概述

酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）--待测抗体（抗原）--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

根据我司多年的研究经验指出ELISA可以用来检测血清样本，看有还是没有某个抗原或抗体，也可以看该抗原或抗体是多还是少，可以比较不同血清样本之间该抗原/抗体的含量高低。

如果该抗原是一个病原，或该抗体是一个对某病原具有特异性的抗体，则ELISA检测该抗原或该抗体的结果，可以用来帮助判断，提供血清的个体，是否感染或曾经感染过这个病原。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（

4800 pmol/L）

0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

样品类型

　标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。

样品采集

　收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，

试剂盒的优点

·特点：
1、灵敏度：有二层含义，1)为试剂检出被检物质的低量的能力；2)为试剂对大量样品中阳性检出的能力;

2、特异性：常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应，使测定结果升高，可能导致假阳性，所以交叉反应是评价其质量的关键指标;

3、精密度：ELISA试剂一般指其批内CV%，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围;

4、准确度：通过添加回收实验进行评价;

5、简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性实验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单;

6、安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性;

7、经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，而市场价格比较合理;

8、试剂评价：需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。

Human Amylin ELISA KIT操作步骤

用于检测未知抗体的间接法：

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。

　　↓ 　　

加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）

　　↓ 　　

于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，　　37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。

　　↓

加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

↓

终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

↓

结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

计算方法

判定Elisa试剂盒结果计算

对于新入行不久，对ELISA的结果分析这块不太熟悉。客户的实验是通过人源的蛋白作为抗原，兔源多克隆抗体作为一抗（我们就是为了通过做ELISA来检测其效价），然后通过辣根过氧化物作为二抗及显色组分。实验做完了，但不知道怎么分析结果，例如标准曲线怎么做之类的。另外，还想问一下，有没有实用的软件可用来分析。对于客户的问题回答：

间接ELISA要是试剂盒，会有标准品的，把标准品按一定浓度梯度稀释一块儿做（一般有三个重复），后酶标仪或分光光度计比色，用软件（oringe）绘制标准曲线，的出公式，按公式将样品带入公式，

用于ELISA结果计算方便的是logit曲线。曲线的横坐标用标样各浓度（ng/ml 或其他单位）的自然对数表示，纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit值的计算方法如下：

B/B0 B

Logit（B/B0）=ln———— =ln————

1-B/B0 B0-B

其中B0是0ng/ml孔的显色值，B是其它浓度的显色值。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。