人纤连蛋白（FN）ELISA试剂盒

                                                                人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                         96T

10ng/L - 240ng/L

人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中纤连蛋白含量。

实验原理

ELISA试剂盒实验原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定OD值，计算样品浓度。

试剂盒组成 

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

酶联免疫（ELISA）送检服务

实验项目：酶联免疫（ELISA）指标检测

客户提供材料：人/动物等的血清、尿液、细胞培养液或人/动植物等组织、细胞样本

周期：2-3周（视样本数而定）

提交结果：实验数据报告（吸光度值及计算结果）

服务报价：酶联免疫（ELISA）试剂盒价格（组织/细胞样本还须加收匀浆费用以及总蛋白定量检测费用）

一、计算原则：

酶联免疫（ELISA）试剂盒分为96T与48T两种规格

96T规格可做到85个样本， 48T规格可做到37个样本，留11孔用作标准曲线

特别提醒：如客户自行提供酶联免疫ELISA试剂盒，则手工费按元/盒收取（视实验难易程度）。

二、样本提供:

人或动物等的血清、尿液、细胞培养液所需样本量不少于100ul；

人或动植物等组织样本量不少于50mg；

细胞样本量不少于106以上。

三、注意事项：

酶联免疫指标要分清种属、规格，指标的中文名称与英文简称

血清、尿液、细胞培养液或上清液样本直接计算检测价格

组织样本或测定细胞内容物的样本，除测定指标外，还必须加匀浆费用以及总蛋白定量检测。

人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月