结合在固相载体表面的抗原或抗体与受检标本（抗原或抗体）起反应。用洗涤的方法洗去未结合的抗原或抗体。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。根据实际的应用方法，可以分成以下几种：

双抗夹心 ELISA：将捕获抗体包被在固相载体上，封闭后加入待检抗原，温育后加入酶标检测抗体，捕获抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗，也可以是针对同一抗原的一种单抗与一种多抗，但是检测抗体需要经过酶标。

竞争ELISA：用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系，终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。主要应用于只有一个抗原表位的蛋白检测。

多因子ELISA检测技术：多重ELISA芯片技术通过在96孔板的每个孔中以阵列的形式植入1~25种捕获抗体，随后像ELISA一样操作，通过化学发光(HRP酶)和荧光燃料(红外)来检测。

受刺激的细胞产生的细胞因子是短暂的，并且不同细胞因子基因表达的动力学是变化的。通过ELISA实验只能检测到的免疫反应性的细胞因子蛋白的含量，而这并不能完全代表细胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗细胞因子抗体的一种ELISA不能区别如TGF-β1的细胞因子蛋白是无活性的前体形式还是有活性的成熟蛋白。此外，一种ELISA可以检测部分降解的细胞因子蛋白，它们仍有免疫反应性（例如至少可识别两个表位），当时它可能却丧失了它们的生物学活性。

二、实验过程：

三、ELISA操作要点：

1.选择合适的固相载体；

2.选择合适的包被缓冲液；

3.确定佳包被量；

4.加样准确，避免产生气泡。

四、ELISA试剂盒优点：

我司共有14000余种ELISA试剂盒物种涵盖Human,Mouse,Rat等，畅销品种具备以下优点：

极高品质—高品质的抗体和试剂是ELISA试剂盒的基础

精确特异—特异检测目标分子，结果精确可重复

高度灵敏—可检测到pg/mL级别的目标

种类齐全—可覆盖人、大鼠、小鼠、棉鼠、猕猴、猪、马、犬和猫等多个种属

优化设计—可拆卸式96孔板(12X8)，为血清、血浆、尿样和细胞培养物样本检测进行优化

五、猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 常见问题解答

小编简单整理了5个问题，具体内容如下：

1、一个ELISA试剂盒检测几个样品？

小编自己在各大论坛看到多的三个答案：

1）48T 可做42个样本加6个标准曲线；96T 可做90个样本加6个标准曲线

2）以96T试剂盒来算，定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品，定性的试剂盒可以做94个左右的样品

3）96T的ELISA试剂盒，去除标准品复孔检测，多还能检测80个标本；48T的多30个样本。

2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品？板能重复利用吗？

96T，一般做复孔的话，做标准曲线需要16个孔，剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。

3、想请教一下，我想用elisa法测血清里的一种抗原，查了资料，发现没有现成的试剂盒用，现在就有2种备选方案，一种是买抗体对自己包被（查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗）。哪种比较好呢？自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢？

如果你觉得技术不错有队其他公司不放心，可以自己购买抗体对自己包被，这个就是麻烦点，自己包被用着放心，舒心；

另外国内还是有一些资质不错的公司，如上海恒远，上海劲马，上海恒远等等

4、western 和ELISA 处理样本有何差别？

Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。

ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。

不过ELISA好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒低可测浓度。

5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢？

提出这个问题的朋友其实该打，目前国际上各个品牌的试剂盒生厂商，都会有其偏重点，像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼，而其他牌子也一样的。看看我司提供的同类产品吧！

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 Monkey apoprotein B100,apo-B100 ELISA KIT
猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒 Monkey apoprotein A1,apo-A1 ELISA KIT
猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒Monkey Interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒Monkey Interferon γ ,IFN-γ ELISA KIT
猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒 Monkey Insulin,INS ELISA KIT
猴子巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA KIT
猴子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒 Monkey monocyte chemotactic protein 1/monocyte chemotactic and activating factor,MCP1/MCAF ELISA KIT
猴子白介素1(IL-1)ELISA试剂盒Monkey Interleukin 1,IL-1 ELISA KIT
猴α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒Monkey Interferon α,IFN-α ELISA KIT
猴肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 Monkey Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT
猴E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 Monkey E-Selectin ELISA KIT
猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒Monkey soluble vasccular cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 ELISA KIT
猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒Monkey Soluble InteFAellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA KIT
猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒 Monkey high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA KIT
猴子白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒Monkey Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA KIT
猴子肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒Monkey adrenomedullin,ADM ELISA KIT
猴子胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 Monkey Collagenase I ELISA KIT
猴子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒Monkey brain natriuretic peptide,BNP ELISA KIT
恒河猴主要组织相容性复合体(MHC/RhLA)ELISA试剂盒 Rhesus major histocompatibility complex,MHC/RhLA ELISA KIT
猴子白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒Monkey Leukotriene C4,LT-C4 ELISA KIT
猴子层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒Monkey Laminin,LN ELISA KIT