洗涤是ELISA实验的关键步骤，直接影响背景信号和检测准确性。以下是实验过程中需注意的核心要点：
一、洗涤液配制与使用
1.缓冲液选择：
推荐使用含0.05%~0.2%吐温20（Tween 20）的PBS或TBS缓冲液，浓度过高可能导致抗原/抗体解吸附。避免使用结晶或污染的洗涤液，需现配现用。
2.温度控制：
洗液温度应保持在20~30℃，低温易导致洗涤不彻底（“花板”现象）。
二、洗涤操作规范
1.预洗步骤：
正式洗涤前需用缓冲液预洗，去除孔内残留杂质。
2.洗涤量与静置时间：
每孔需注满洗涤液（200~300μL），确保覆盖孔壁。
静置1~2分钟后再弃液，充分溶解未结合物质。
3.去除残留液体：
倒扣酶标板于吸水纸上拍干，避免交叉污染。
手动拍板时力度需均匀，防止破坏抗原-抗体复合物。
三、洗涤次数与方式
1.次数要求：
通常需重复3~6次，具体根据试剂盒说明调整。
2.自动化洗板机使用：
优先选择浮动式吸头洗板机，适配U型/V型底孔板。
设置过量洗涤程序（如1mL/孔）可提高清洗效果。
四、常见问题与解决方案
1.背景信号高：
检查洗涤是否彻底，或增加洗涤次数。
排查洗液pH和吐温20浓度是否合适。
2.孔间污染：
避免洗液溢出，手动操作时更换吸头。
3.板面不平整：
酶标板放置需水平，否则洗板机可能残留液体。
五、洗涤后处理
1.及时下一步操作：
拍干后尽快加底物或抗体，减少酶标物失活风险。
2.记录洗涤顺序：
确保各孔显色时间一致，避免批次误差。
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