血清和血浆是酶联免疫试剂盒实验中常用的样本类型,那么制备方法是什么呢,到底该如何制备,不要着急,恒远生物给你唠唠。
一、血清(serum)的一般制备方法可参考以下:
1.采集血液样本,置于不含抗凝剂的收集管内(试管或离心管)。
2.室温下静置自然凝集30~60min,待血液凝固。
3.沿收集管壁将血凝块轻轻划开。
4.4℃放置过夜,平衡后,低温低速离心10min。
(低温:4℃;低速:人血~2000rpm、小鼠~1000rpm、大鼠~2500rpm)
5.上清即为血清,大概1ml血液能收集300-400ul血清。
6.立即操作、冷藏或冷冻血清样品。
二、血浆(plasma)的一般制备方法可参考以下:
1.采集血液样本,置于含有适当抗凝剂的收集管内(试管或离心管)。
2.轻轻颠倒摇动收集管,以混匀血液。
3.低温低速离心10min(血样采集后1h之内进行)。
4.上清即为血浆。
5.立即操作,冷藏或冷冻血浆样品。
常见血清问题分析:
问题一:如何贮存和冻结血清才不会使产品质量受损?
答:将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但有必要注意的是,融解过程中有必要规矩地摇晃均匀。长时刻贮存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而构成沉积或可见的混浊。因而,推荐在-20℃以下贮存血清,并防止反复冻融。主张血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,主张无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
问题二:血清中包含絮状沉积,它们是什么,怎样处理?
答:沉积包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除掉沉积,离心血清(400g,1-2分钟)或许简单的让其沉积在瓶子底部,将血清当心的 转移到另一个无菌瓶里(一般不主张选用过滤的办法除掉沉积,由于沉积会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉积并加热至37℃就会再溶解。所以,运用 产品时要摇动并加热血清至37℃,沉积会天然消失。
问题三:如何防止血清中发作沉积?
答:按如下操作可防止沉积的发作:
(1)冻结血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,削减沉积的发作。
(2)血清分装冻存时,须规矩摇晃均匀(当心勿形成气泡),使温度与成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃冻结,因温度改变太大,简单形成蛋白质凝结而发作沉积。
(4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得污浊,一起血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏,从而影响血清的品质。
(5)血清的热灭活非常简单形成沉积物的增多,若非必要,能够无须做此步骤。
(6)若有必要做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时刻过久或摇晃不均匀,都会形成沉积物的增多。
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