恒远生物|酶联免疫试剂盒定性or定量?
发布时间:2020/8/3 11:31:16 已浏览次数: 2020 次

    常有伙伴问ELISA试剂盒定性定量有什么区别？今天恒远生物就给大家把这个难题给解答咯，定性分析与定量分析应该是统一的，相互补充的；定性分析是定量分析的基本前提，没有定性的定量是一种盲目的、毫无价值的定量；定量分析使之定性更加科学、准确，它可以促使定性分析得出广泛而深入的结论。

    定性试剂盒是判断一种物质在某种样本中的有无，一般表示为阴性或者阳性，具体是通过OD值来判定的，不能计算出该物质的具体浓度。一般定性试剂盒只会自带一种阴性标准和一种阳性标准。

    定量试剂盒是用来测定一种物质在某种样本中的具体浓度值是多少，一般是有单位的，比如ng/ml，这种试剂盒主要是用来测定这种物质的具体变化情况，例如是升高了还是降低了，升高了多少，降低了多少等等。一般用到定量的试剂盒的时候就已经确定样本中含有该物质。

今天就拿白介素6（IL-6）酶联免疫试剂盒在实验中的操作步骤给大家唠唠，请搬起小板凳，来围观吧！

采用酶联免疫法检测恒远生物 IL-6试剂盒含量，检测严格按照说明书操作。主要步骤：

(1)样品解冻：将血清从冷冻冰箱取出后，先放置于2-8℃冰箱使之全融，融解过程将血清规则地摇晃均匀。(实验前室温平行一小时，尽量保持样本和试剂盒保持同一温度)

(2)编号：将样品在酶标包被板上对应的微孔按照顺序依次编号，每板分别设立2个阴性对照孔、2个阳性对照孔、1个空白对照孔（注意不添加任何样品及酶标试剂到空白对照孔当中，其他的操作步骤均相同） 

(3)加样：分别先将50μl的阴性对照液体、阳性对照液体加到酶标包被板上对应的阴、阳性对照孔当中。然后再将40μl的样品稀释液加到待测样品孔当中，最后将10μl的待测样品加到待测样品孔当中。注意加样时尽量不碰到孔壁，加样加在酶标包被板板孔底部，轻轻摇动充分混匀。

(4)温育：先用封板膜将酶标包被板封板，然后放置于37℃恒温箱当中，温育30分钟。 

(5)配液：用蒸馏水30倍稀释30倍浓缩洗涤液后备用 

(6)洗涤：先小心地把封板膜揭去，然后将液体轻轻地弃去并甩干，将洗涤液加满每个板孔，经过30秒的静置之后弃去，这样重复5次，最后拍干。 

(7)加酶：除了空白孔之外，将50μl酶标试剂加到每个板孔当中。 

(8)温育：再次用封板膜将酶标包被板封板，然后放置于37℃恒温箱当中，温育30分钟。  

(9)洗涤：先小心地把封板膜揭去，然后将液体轻轻地弃去并甩干，将洗涤液加满每个板孔，经过30秒的静置之后弃去，这样重复5次，最后拍干。 

(10)显色：首先将50μl显色剂A加入到每个板孔当中，然后再将50μl显色剂B加入到每个板孔当中，轻轻震荡混匀，最后放置于37℃恒温箱中当中避光显色15分钟。

(11)终止：将50μl终止液加到每个板孔当中来终止反应，此时可看到蓝色立即转为黄色。 

(12)测定：在加终止液15分钟以内必须进行吸光度（OD值）的测定，拿空白孔调零，以450nm 的波长按照顺序依次测量各孔的值。

计算和结果的判定：按照说明书计算临界值（CUT OFF）

阳性结果判定：样品OD值≥临界值（CUT OFF）者为沙眼衣原体相关抗体阳性

阳性结果判定：样品OD值<临界值（CUT OFF）者为沙眼衣原体相关抗体阴性

采用酶联免疫法定量检测血清、宫颈分泌物中IL-6。检测严格按照说明书操作。主要步骤：

(1)样品解冻：将血清从冷冻冰箱取出后，先放置于2-8℃冰箱使之全融，融解过程将样品规则地摇晃均匀。

(2)标准品的稀释：按照试剂说明书中的方法。（补充一下宫颈分泌物中与血清的不同点？？）说明：血清其实很简单，无非去上清液待检即可，但分泌物受制约于样本的收集，比如棉拭子浸润的程度，包括后期样本提取过程加入的PBS的量的多少，都会对最终结果产生影响，但对于抗体本身的阴性和阳性判定来讲，问题不大，主要是检测含量的时候可能会有一些波动

(3)加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，然后再将40μl的样品稀释液加到待测样品孔当中，最后将10μl的待测样品加到待测样品孔当中。注意加样时尽量不碰到孔壁，加样加在酶标包被板板孔底部，轻轻摇动充分混匀。

(4)温育：先用封板膜将酶标包被板封板，然后放置于37℃恒温箱当中，温育30分钟。 

(5)配液：用蒸馏水30倍稀释30倍浓缩洗涤液后备用 

(6)洗涤：先小心地把封板膜揭去，然后将液体轻轻地弃去并甩干，将洗涤液加满每个板孔，经过30秒的静置之后弃去，这样重复5次，最后拍干。 

(7)加酶：除了空白孔之外，将50μl酶标试剂加到每个板孔当中。 

(8)温育：再次用封板膜将酶标包被板封板，然后放置于37℃恒温箱当中，温育30分钟。  

(9)洗涤：先小心地把封板膜揭去，然后将液体轻轻地弃去并甩干，将洗涤液加满每个板孔，经过30秒的静置之后弃去，这样重复5次，最后拍干。 

(10)显色：首先将50μl显色剂A加入到每个板孔当中，然后再将50μl显色剂B加入到每个板孔当中，轻轻震荡混匀，最后放置于37℃恒温箱中当中避光显色15分钟。

(11)终止：将50μl终止液加到每个板孔当中来终止反应，此时可看到蓝色立即转为黄色。 

(12)测定：在加终止液15分钟以内必须进行吸光度（OD值）的测定，拿空白孔调零，以450nm 的波长按照顺序依次测量各孔的值。

计算：用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

恒远生物 白介素指标试剂盒文献支持（部分精选）

【文献标题】Effects of Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide on the subunit vaccine of Proteus mirabilis in birds

【作者单位】山东农业大学（Shandong Agricultural University）

【文献中引用产品】

鸡白细胞介素2（IL-2）ELISA试剂盒

【DOI】http://dx.doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.02.006

【影响因子(IF)】4.97

【出版期刊】《International Journal of Biological Macromolecules》

【文献标题】Therapeutic effect of human amniotic epithelial cells in murine models of Hashimoto’s thyroiditis ａnd Systemic lupus erythematosus

【作者单位】浙江大学（Zhejiang University）

【文献中引用产品】

小鼠白介素17A（IL-17A）ELISA试剂盒

小鼠白介素4（IL-4）ELISA试剂盒

小鼠白介素10（IL-10）ELISA试剂盒

【DOI】https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2018.04.001

【影响因子(IF)】3.84

【出版期刊】《International Society》

【文献标题】Modeling analysis of the relationship between atherosclerosis ａnd related inflammatory factors

【作者单位】郑州大学第二附属医院（The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University）

【文献中引用产品】

人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒

【DOI】https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2017.11.016

【影响因子(IF)】3.14

【出版期刊】《Saudi Journal of Biological Sciences》

【文献标题】Both MicroRNA-155 ａnd Virus-Encoded MiR-155 Ortholog Regulate TLR3 Expression

【作者单位】扬州大学（Yangzhou University）

【文献中引用产品】

鸡白细胞介素6（IL-6）ELISA试剂盒

【DOI】DOI:10.1371/journal.pone.0126012

【影响因子(IF)】3.02

【出版期刊】《PLOS ONE》

【文献标题】Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-κB ａnd TNF-α in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis

【作者单位】解放军总医院（PLA General Hospital）

【文献中引用产品】

大鼠白介素1（IL-1）ELISA试剂盒

大鼠白介素6（IL-6）ELISA试剂盒

【DOI】DOI: 10.3892/etm.2015.2802

【影响因子(IF)】1.50

【出版期刊】《Experimental ａnd Therapeutic Medicine》

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