免疫学是研究生物体对抗原物质免疫应答性及其方法的生物-医学科学.免疫应答是机体对抗原刺激的反应,也是对抗原物质进行识别和排除的一种生物学过程.在免疫学中,IHC Western ELISA,三大实验分别用于定位,定性和定量.
IHC(免疫组化Immunohistochemistry)
是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材 固定 包埋 切片 脱蜡 水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素 酶 金属离子 同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位 定性及定量的研究(主要是定位).样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性 质阳性和核阳性.
ELISA(酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay)
用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清 血浆 尿液 细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋 切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义.
WB (蛋白质印迹Western Blot)
先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量.
对于IHC来说,定位是免疫组化最大的优势
该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定位较直接准确 定性灵敏度高,是定位检测分析首选方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义,尤其对于有些因子的转位研究十分有用.
WB与IHC技术相比,定量可能更加准确
当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白 胞浆蛋白分别检测其中抗原含量,进而间接反映它们的定位),但敏感性远远低于IHC.
ELISA与免疫组化技术相比,定量最准确,是分泌性蛋白检测首选方法之一.
尤其对于微定量分析多个样本非常有用,所用试剂和样品量很少,结果精确.IHC针对性比较强,而且一般是以组织或者细胞为样本,而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液.免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性,一般不用于定量检测.
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