抗体(Antibody),又称免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称 Ig),是一种由B细胞分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌 病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面.那么你知道从哪几方面去鉴定抗体吗?
1 抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价.不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一.鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应 琼脂扩散试验 酶联免疫吸附试验等.常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较.如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定.
2 抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力.抗体的特异性高,它的识别能力就强.衡量特异性通常以交叉反应率来表示.交叉反应率可用竞争抑制试验测定.以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按下列公式计算交叉反应率.
交叉反应率=IC50时抗原浓度(Y)/ IC50近似抗原物质的浓度(Z)X 100%
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好.
3 抗体的亲和力 抗体的亲和力是指抗体和抗原结合的牢固程度.亲和力的高低是由抗原分子的大小 抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的.有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键 疏水键 侧链相反电荷基因的库仑力 范德华力和空间斥力.亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol,通常K的范围在108~1010/mol,也有多达1014/mol.抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义.
抗血清的冻存
抗血清收获后,加万分之一的硫柳汞或万分之二的叠氮钠防腐,或加入等量的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下的低温保存,数月至数年内抗体效价无明显变化.注意避免反复冻融.也可将抗血清冷冻干燥后保存.
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