恒远教您如何完善ELISA试剂盒实验中的过失?
发布时间:2018/4/19 10:32:34 阅读次数：795

       ELISA操作步骤多，新手操作难免会有过失。而这些过失很多是由细节不够好造成的，减少过失的方法有很多，比如做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。当然，大家还要学会自己发掘问题，找出原因。今天上海恒远教您如何完善ELISA试剂盒实验中的过失?
    ①：评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。
    ②：操作前仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进，比如洗板次数的掌握等。
    ③：加样要准确、快速。加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。另外，显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。

    ④：检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。
    ⑤：使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。
    ⑥：严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。
    ⑦：洗涤彻底，洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外，洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。
    ⑧：严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。